No More Heroes vertelt een verhaal over een anime fan genaamd Travis Touchdown. Hij leidt een normaal leven in Santa Destroy, Californië. Na een onbegrijpelijke gebeurtenissen bevindt Travis zich in een Assassin's organisatie. In die organisatie moet Travis zich bewijzen en krijgt hij de taak om tien verschillende bloeddorstige moordenaars te verslaan. Dit doet hij niet door hen te vermoorden, maar door verschillende missies te halen. Als je hierin slaagt, mag je jezelf een ware koning der Assassin's noemen.

Met behulp van de Wiimote kun je Travis' katana heen en weer zwiepen en je kan ook spectaculaire moves maken. Toch benadrukt de ontwikkelaar, Suda 51, de grappige en rare stijl van de game, hoewel de game een bloeddorstig verhaal heeft.